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T/YNRZ 019-2024 珠芽黄魔芋组培种苗生产技术规程

T/YNRZ 019-2024 珠芽黄魔芋组培种苗生产技术规程

T/YNRZ 019-2024

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  • 标准名称：珠芽黄魔芋组培种苗生产技术规程
  • 标准号：T/YNRZ 019-2024
    中国标准分类号：B23/A012
  • 发布日期：2024-06-17
    国际标准分类号：65.020.20
  • 实施日期：2024-06-30
    团体名称：云南省热带作物学会
  • 标准分类：农业A 农、林、牧、渔业

内容简介

本文件规定了珠芽黄魔芋组培种苗生产技术中的培养基母液的配制、培养基生长调节剂的配制、培养基制备、接种、培养、炼苗移栽和种苗出圃等内容
本文件适用于珠芽黄魔芋组培种苗生产
1　术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。2　培养基母液的配制2.1母液的配制方法和保存试剂配制严格按照GB/T603规定方法配制，所用水执行GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法标准。通常将常用试剂配制成比培养基所需浓度高10倍～100倍的母液，母液置于4℃的冰箱中贮存。2.2大量元素母液的配制分别称取硝酸铵33g、硝酸钾38g、磷酸二氢钾3.4g、七水硫酸镁7.4g、二水氯化钙8.8g，分别加少量蒸馏水在不同的容器内充分溶解，用玻璃棒搅拌促溶解，定容至1000ml容量瓶，置棕色广口瓶中保存，贴上标签。2.3微量元素母液的配制分别称取碘化钾0.166g、硼酸1.24g、四水硫酸锰3.38g、七水硫酸锌1.72g、二水钼酸钠0.05g、五水硫酸铜0.005g、六水氯化钴0.005g，可混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解定容至1000ml容量瓶，置棕色广口瓶中保存，贴上标签。2.4铁盐母液的配制称取乙二胺四乙酸二钠7.46g和硫酸亚铁5.56g，分别溶于450ml蒸馏水中，加热，不断搅拌，溶解后，两液混合，调PH至5.5加水定容至1000ml，置棕色广口瓶中保存，贴上标签。2.5有机母液的配制分别称取烟酸0.05g、VB?0.01g、VB?0.05g、甘氨酸0.2g，混合置于烧杯内加少量蒸馏水溶解定容至1000ml容量瓶，置棕色广口瓶中保存，贴上标签。3　培养基生长调节剂的配制3.1NAA的配制和保存称取NAA0.1g，先用少量95%乙醇或无水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。3.26-BA的配制称取6-BA0.1g，先用少量95%乙醇或无水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。3.3KT的配制和保存称取KT0.1g，先用少量95%乙醇或无水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。3.4TDZ的配制和保存称取TDZ0.1g，先用少量95%乙醇或无水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。4　培养基制备4.1制备方法培养基由试剂、蔗糖、琼脂、水组成，蔗糖和水应分别符合GB/T317和GB5749规定，试剂配制严格按照GB/T603规定方法配制，所用水执行GB/T6682分析实验室用水规格。4.1.1　称量称取所需量的琼脂和蔗糖单独放入烧杯中，加入少量的蒸馏水，搅拌让其溶化。4.1.2　配制依次把称取好的母液及生长调节剂倒入已溶化的琼脂中，加入蔗糖，置于电磁炉上加热，不断搅拌，直至琼脂和蔗糖完全溶解最终定容到所需体积。4.2pH值调整培养基最佳pH值为5.8，采用酸度计或精密pH试纸测定，通常用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCL来调节。4.3培养基分装配制好的培养基需趁热分装，分装量以培养容器体积的1/4～1/3为宜，分装后应立即密封。4.4培养基灭菌培养基分装后在24h内完成灭菌工作，在压力为0.105MPa，温度121℃的条件下，灭菌25min～30min。4.5培养基保存灭菌后的培养基应保存于洁净、干燥的培养基储存室中，2℃～4℃条件下7d内使用。5　接种5.1外植体的选择选用无病虫害、健壮的珠芽为外植体。5.2外植体的消毒珠芽应先去皮，用自来水冲洗30min，将洗净后的珠芽转至超净工作台上，用75%乙醇浸泡10s～20s，用无菌水冲洗2次，再用0.1%升汞消毒12min，最后用无菌水冲洗5次～7次后备用。5.3外植体的接种在超净工作台上，将消毒后的珠芽黄魔芋珠芽切成约0.5cm×0.5cm的小块，接种到初代培养基上，切口接触培养基，接种后做好标记。6　培养6.1培养条件珠芽黄魔芋最适宜的培养温度为26℃，光照强度为2000Lx，光照时间为10h/d。6.2初代培养6.2.1　初代培养基珠芽黄魔芋组培快繁技术中诱导培养基为MS+TDZ0.5mg/L+NAA2.0mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。6.2.2　初代培养基条件接种好的培养瓶放置在培养架上，培养30d～50d形成愈伤组织或丛生芽。丛生芽和愈伤组织继续培养或者转接，培养30d左右，形成完整组培苗。6.3增殖培养6.3.1　叶片培养将无菌组培苗浓绿厚大的叶片切成大小约0.5cm×0.5cm小块，叶面朝上平铺于培养基上，培养周期30d～50d，形成愈伤组织和丛生芽。6.3.2　叶柄培养将无菌组培苗生长健壮的叶柄切成约1cm的小段，扦插于培养基上，培养周期30d～50d，形成愈伤组织和丛生芽。6.3.3　叶柄和叶片继代增殖培养基叶柄和叶片继代增殖培养基为MS+TDZ0.2mg/L+NAA0.4mg/L+6BA1.0mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。6.3.4　愈伤组织培养将剪掉叶片和叶柄的愈伤组织分割成约大小0.5cm×0.5cm，转接到叶柄和叶片继代增殖培养基上，培养周期30d左右，形成无根苗。6.3.5　愈伤组织培养基愈伤组织继代增殖培养MS+KT0.9mg/L+NAA0.2mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。6.4生根培养6.4.1　生根培养条件丛生芽或无根苗转接至生根培养基上，培养周期15d左右，形成完整的组培苗。6.4.2　生根培养基生根培养基为MS+IBA1.0mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+琼脂6g/L。7　炼苗移栽7.1炼苗在室温、自然光下，选择株高3cm～5cm的组培苗，先拧松瓶盖放置2d～3d，再半揭瓶盖放置2d～3d，最后完全揭开瓶盖放置3d～5d后即可进行移栽。7.2移栽驯化从瓶中取出经过炼苗的组培苗，用自来水洗去附着的培养基，移栽到32孔育苗盘中。移栽基质为椰糠:泥炭土按体积比1:1。7.3苗期管理保持基质内含水量50%～70%，温度25℃，遮荫度70%。待所有组培苗成活后，喷施2000倍叶面水溶复合肥（N:P2O5:K2O=15:5:25）。8　种苗出圃组培苗驯化移栽30d～60d左右可出圃。

起草单位

云南省热带作物科学研究所。

起草人

魏丽萍、黄 菁、田耀华、岩香甩、穆洪军、何海宁、龚燕雄、刘世红、张兆豪。

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