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T/CGTA 11-2025 大豆转基因成分的快速检测 环介导等温扩增（LAMP）检测法

T/CGTA 11-2025 大豆转基因成分的快速检测 环介导等温扩增（LAMP）检测法

T/CGTA 11-2025

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标准详情

  • 标准名称：大豆转基因成分的快速检测 环介导等温扩增（LAMP）检测法
  • 标准号：T/CGTA 11-2025
    中国标准分类号：X11/M731
  • 发布日期：2025-08-01
    国际标准分类号：67.020
  • 实施日期：2025-08-01
    团体名称：中国粮食商业协会
  • 标准分类：食品技术M 科学研究和技术服务业

内容简介

本文件规定了大豆中转基因成分环介导等温扩增快速检测方法的术语和定义、原理、仪器与设备、试剂与材料、样品制备、检测方法和判定规则的要求
本文件适用于大豆中转基因成分CP4-EPSPS、G2-EPSPS和G10evo-EPSPS核酸序列的快速检测
6.1试剂除另有说明外，所有试剂均为分析纯或生化试剂，实验室用水应符合GB/T6682中的一级水的要求。6.1.11MTris-HCl（pH8.0）。6.1.20.5MEDTA（乙二胺四乙酸二钠，pH8.0）。6.1.3NaCl（氯化钠）。6.1.4CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）。6.1.51MHCl（盐酸）。6.1.610MNaOH（氢氧化钠）。6.1.7dNTPs溶液：每种核苷酸浓度10mmol/L。6.1.8BstDNA聚合酶大片段（如：NEB公司或具有同等效果的DNA聚合酶）：酶浓度8U/μL。6.1.910×ThermoPolReactionBuffer：含200mmol/LTris-HCl（pH8.8）、100mmol/LKCl、100mmol/L(NH4)2SO4、20mmol/LMgSO4、1%TritionX-100。6.1.10MgSO4溶液：150mmol/L。6.1.11甜菜碱溶液：5mol/L。6.1.12酚红溶液：10%。6.1.13引物：内源基因、CP4-EPSPS、G2-EPSPS和G10evo-EPSPS环介导等温扩增（LAMP）检测方法作用引物见表1。6.2溶液配制6.2.1裂解液：量取10mL1MTris-HCl（pH8.0）（6.1.1）、0.8mL0.5MEDTA（pH8.0）（6.1.2），称取81.86gNaCl（6.1.3）、2gCTAB（6.1.4）加入烧杯中，加入约800mL水，搅拌溶解。用盐酸（6.1.5）或NaOH（6.1.6）调节pH至8.0，加水定容至1L，混匀。6.2.2复溶液：量取10mL10MTris-HCl（pH8.0）（6.1.2）、2mL0.5MEDTA（pH8.0）（6.1.3），加入烧杯中，加入800mL水，搅拌混匀。用盐酸（6.1.5）或NaOH（6.1.6）调节pH至8.0，加水定容至1L，混匀。6.2.3扩增反应液：内源基因、CP4-EPSPS、G2-EPSPS和G10evo-EPSPS环介导等温扩增（LAMP）反应液配制见表2。分别配制各检测基因扩增反应液后按照25μl/管分装至0.2mL离心管中，-80℃快速冷冻30min，预冷冻后的试剂转移至冻干机-40℃保持2h，启动真空泵将压力降至0.1mBar以下，缓慢升温（0.5℃/min）至-20℃，使冰晶逐渐升华。再将温度（0.2℃/min）逐渐升至20℃，保持真空状态2h后关闭真空泵，充入惰性气体恢复常压。取出冻干后的试剂，盖上离心管盖。7　样品制备7.1抽样和制样粮食样品扦样采样操作按照GB/T5491进行，采集样品的制备按照GB/T19495.7进行。7.2样品前处理7.2.1裂解：取0.20g±0.05g籽粒粉末于5mL离心管中，加4mL裂解液（6.2.1），上下颠倒混匀（或涡旋混匀30s），此为样品裂解液。7.2.2复溶：取25μL样品裂解液（7.2.1）加入一个新的1.5mL的离心管中，再向离心管中加入1mL复溶液（6.2.2），上下颠倒混匀（或涡旋混匀30s），备用。此为样品复溶液。8　样品测定8.1试液配制更换移液器吸头，取25μL样品复溶液（7.2.2）加入提前准备好扩增反应液（6.2.3）的冻干管中，换4联管盖，盖紧管盖后上下颠倒混匀（或涡旋混匀30s），用手将液体甩至管底（注意液体不要有气泡）。8.2核酸扩增将试液（8.1）置于65℃水浴锅（5.1）中恒温扩增30min，反应结束。8.3结果判定8.3.1质量控制内源基因检测试剂应为黄色或橘黄色，如不符合应重新进行试验。8.3.2结果判断内源基因检测试剂为黄色或橘黄色，外源基因检测试剂为红色时，判定该样品不含所检基因，可表述为“未检出×××基因”。内源基因检测试剂为黄色或橘黄色，外源基因检测试剂为黄色或橘黄色时，判定该样品含有所检基因，应按照GB/T19495.4标准确证实验结果，再根据确证结果判断和表述。

起草单位

百沃特（天津）生物技术有限公司、中粮营养健康研究院有限公司、北大荒粮食集团有限公司、黑龙江象屿农业物产有限公司、通标标准技术服务（青岛）有限公司。

起草人

马增彬、钱承敬、仉磊、刘晓萌、王健、李俊、于旭德、韩冀、杨若松、龚雅云。

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